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IMAC(His) 預(yù)裝柱的使用方法-上海信帆生物

更新時(shí)間:2020-02-26      瀏覽次數(shù):3339

IMAC(His) 預(yù)裝柱的使用方法-上海信帆生物

上海信帆生物供應(yīng)IMAC(His) 預(yù)裝柱,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,價(jià)格實(shí)惠,深受廣大科研用戶青睞!

建議使用高純度的咪唑,高純度的咪唑在280nm的吸光值較低,甚至不顯示吸光值。緩沖液中咪唑的佳濃度因蛋白的濃度和性質(zhì)而異。

如果重組His標(biāo)簽蛋白是以包涵體的形式表達(dá),建議在各緩沖液或樣品中添加6M鹽酸胍或8M尿素。使用高濃度的尿素或鹽酸胍,有可能引起蛋白變性,變性蛋白可以實(shí)現(xiàn)復(fù)性。

當(dāng)純化柱所需柱壓明顯升高時(shí),則需要清洗,清洗方法如下:

a. 用至少5~10倍體積的100mM EDTA清洗柱體;

b. 用10倍體積的1.5M NaCl清洗柱體;

c. 用10倍體積的蒸餾水清洗柱體;

d. 用0.2M NaOH處理1~2小時(shí)(清除內(nèi)毒素需12小時(shí));

e. 用10倍體積的蒸餾水清洗柱體;

f. 用2倍體積0.1~0.5%的非離子去污劑(溶于0.1M醋酸)處理1-2小時(shí);

g. 用5倍體積70%的乙醇清洗柱體;

h. 用10倍體積的蒸餾水清洗柱體。

 

保存溫度:

 

用20%的乙醇在中性pH值的條件下沖洗介質(zhì)和柱子,在4℃~8℃條件下儲(chǔ)存。

 

應(yīng)用實(shí)例:

 

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的HIS標(biāo)簽蛋白,其細(xì)胞分泌上清通過IMAC(His)柱進(jìn)行富集濃縮,高效地純化回收。

圖例)

泳道1:上樣;

泳道M:Protein Marker;

泳道3:流出;泳道4:洗脫1;

泳道5:洗脫2;泳道6:洗脫3。

產(chǎn)品描述:

 

螯合的Sepharose,當(dāng)帶有Ni2+離子時(shí),如果形成氨基酸殘基的復(fù)合物,特別是組氨酸殘基被暴露在蛋白質(zhì)表面時(shí),可以選擇性的結(jié)合蛋白質(zhì)。(His)6融合蛋白可以很容易的結(jié)合到親和柱上,然后用含有咪唑的緩沖液進(jìn)行洗脫。 

 

產(chǎn)品用途:

 

His融合蛋白的純化。

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