從21世紀(jì)初期，由于免疫學(xué)研究中一個(gè)非常活躍的領(lǐng)域就是細(xì)胞因子的研究，它的檢測(cè)成為現(xiàn)代生物科學(xué)研究的重要方面。國內(nèi)的生物廠家，運(yùn)用抗原、抗體反應(yīng)的原理已研制出了高靈敏度（sensitive）、高特異性、高度配套的細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒，生物試劑的檢測(cè)試劑盒涵蓋幾乎所有的細(xì)胞因子。依據(jù)檢測(cè)方法不同，可分為ELISA測(cè)定（酶聯(lián)免疫）和放射免疫測(cè)定。
放射免疫測(cè)定是將同位素分析的高靈敏度與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，方法大多采用競(jìng)爭(zhēng)法原理。待檢的細(xì)胞因子與放射性同位素標(biāo)記的細(xì)胞因子競(jìng)爭(zhēng)與細(xì)胞因子抗體（多克隆抗體或單克隆抗體）結(jié)合，再通過分離劑分離結(jié)合狀態(tài)的標(biāo)記物，計(jì)數(shù)后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出細(xì)胞因子的量。本法具有靈敏度高（可檢測(cè)出ng甚至pg水平），特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。
2.ELISA測(cè)定
2-1.酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)（ELISPOT） 檢測(cè)試劑盒是基于定量夾心ELISA法原理，將刺激后的細(xì)胞滴加到包被在貼PVDF微孔中，放置于37℃孵育。在孵育的過程中，細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子即會(huì)被包被的抗體所捕獲，以下的過程與一般的ELISA實(shí)驗(yàn)相同，zui后用不溶性的酶聯(lián)底物進(jìn)行顯色，每一個(gè)顯色點(diǎn)（斑點(diǎn)）既代表一個(gè)分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞。通過的ELISPOT分析儀或在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，就可以進(jìn)行分析。ELISPOT法用于檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，綜合了普通ELISA方法的高特異性和準(zhǔn)確定量的優(yōu)點(diǎn)，而且具有生物活性分析得出與功能相關(guān)的結(jié)果的優(yōu)點(diǎn)。
2-2.雙抗夾心ELISA法 雙抗體夾心法需制備針對(duì)細(xì)胞因子不同位點(diǎn)的兩個(gè)單克隆抗體，一個(gè)抗體作為固相抗體用于包被，另一個(gè)作為標(biāo)記抗體?？刹捎贸Ｒ?guī)雙抗夾心法，也可采用一步法。由于血清中細(xì)胞因子的含量很低。常規(guī)ELISA法不能滿足要求，需引入生物素－親合素系統(tǒng)來提高靈敏度，即加入樣品后加入生物素標(biāo)記的另一個(gè)抗體，再加入親合素及生物素化的酶，再加入底物進(jìn)行顯色，顏色與待檢的細(xì)胞因子量呈正比
三、試劑盒檢測(cè)細(xì)胞因子的優(yōu)缺點(diǎn)
A. 優(yōu)點(diǎn)
1.特異性強(qiáng)，這是標(biāo)記免疫技術(shù)的共同特點(diǎn)。
2.使用簡(jiǎn)便，省時(shí)。
3.重復(fù)性好，影響因素少，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。
B. 缺點(diǎn)
1.測(cè)定的是蛋白的含量而不是生物學(xué)活性。
2.檢測(cè)的靈敏度不如生物學(xué)活性法。
3.由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室制備的抗體不同，同一樣品用不同ELISA試劑盒檢測(cè)的結(jié)果也不一樣，實(shí)驗(yàn)室之間難以進(jìn)行質(zhì)量控制
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更新時(shí)間：2013-05-29 
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