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上海信帆生物:蛋白凝膠染料隨心選,不止是考馬斯藍(lán)

更新時間:2016-05-26      瀏覽次數(shù):1400

與DNA凝膠電泳一樣,蛋白質(zhì)凝膠電泳也是實驗室中稀松平常的工作。無論是Western blot還是質(zhì)譜分析,都離不開蛋白電泳。研究人員通過大小(1D)和電荷(2D)來分辨蛋白質(zhì)。當(dāng)然,僅僅分離蛋白是不夠的,它們必須要經(jīng)過染色。染料的選擇有很多,具體選哪種,這取決于靈敏度要求、現(xiàn)有的設(shè)備和下游的應(yīng)用。

常規(guī)之選

研究人員主要使用三種染料來處理日常的蛋白凝膠:考馬斯藍(lán)、銀染和熒光。據(jù)Sigma-Aldrich公司蛋白技術(shù)的研發(fā)Jeffrey Turner介紹,染料的選擇基本上可以歸結(jié)為“靈敏度 vs. 速度”。

考馬斯藍(lán)也許是zui常用的染料。作為一種可見的顯色(亮藍(lán)色)染料,它不需要任何特殊的設(shè)備。不過,Bio-Rad的業(yè)務(wù)開發(fā)Ning Liu認(rèn)為,它的靈敏度也zui低,檢測極限大約在10-100 ng蛋白質(zhì)。

很多公司提供不同配方的考馬斯藍(lán)染料,它們在使用簡便程度、整體染色時間和脫色要求上各有不同。例如,有些需要在乙醇/乙酸中固定,而有些只使用純水。Expedeon的InstantBlue™試劑可在電泳后直接添加到凝膠中,而不需要固定或脫色,染色可在15分鐘內(nèi)完成。Bio-Rad的QC Colloidal Coomassie Stain操作則建議慢慢來,以便達(dá)到更好的效果。整個過程包括在40%乙醇/10%乙酸中固定15分鐘,之后染色1-20個小時,再脫色1-3小時。

有了賽默飛世爾推出的Pierce™ Power Stainer,研究人員可以讓考馬斯藍(lán)染色自動化。據(jù)它的產(chǎn)品Emily Goplen介紹,這臺設(shè)備可對兩塊凝膠進(jìn)行染色和脫色。“盡管傳統(tǒng)的染色需要幾小時甚至,Power Stainer卻能在10分鐘內(nèi)完成染色和脫色的過程,并且預(yù)制膠和自制膠都適用,”她說。

另一種常用方法是銀染,每條帶的靈敏度大約在0.1-0.25 ng。操作過程沒有脫色步驟,但是一個很長的過程,大約在2小時左右,而且相當(dāng)講究。此外,據(jù)Turner介紹,操作需要用到一些有害的化學(xué)物質(zhì),如甲醛和銀,在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。因此,人們一般不大愿意用這種方法,除非靈敏度很重要。

熒光染料的靈敏度則居中,可檢測幾納克的蛋白質(zhì),不過你得有一個兼容的凝膠成像系統(tǒng)或透射儀。與考馬斯藍(lán)和銀染一樣,熒光染色通常在電泳后進(jìn)行,需要固定和脫色,不過也有例外。例如,SYPRO Ruby需要脫色,但Oriole和Flamingo不需要,因為游離的染料不發(fā)熒光。“染料本身不會被激光激發(fā),只有當(dāng)它與蛋白結(jié)合時才被激發(fā),”Liu解釋道。

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